肝肝門靜脈（iPo）注射胰腺導管腺癌（PDAC）腫瘤細胞來模擬肝轉移。選擇這種方法，因為轉移是胰腺導管腺癌（PDAC）的早期事件，通過這個模型，可以研究巨噬細胞在肝臟轉移級聯早期（播種階段）和晚期（生長階段）中的作用。
肝臟巨噬細胞在轉移播種過程中有什么作用呢？為了清除巨噬細胞，我們使用了荷蘭Liposoma廠家的包裹有氯膦酸的脂質體ClodronateLiposomes（CEL），在轉移挑戰之前給藥。包裹有氯膦酸的脂質體ClodronateLiposomes（CEL）清除了肝臟中的庫普弗細胞（KCs）和骨髓來源的巨噬細胞（BMDMs）（圖3b-d）。然而，巨噬細胞的清除對轉移播種沒有影響。我們還測試了KCs在轉移播種中的具體作用。為此，我們向Clec4f-cre-tdTomato /-Rosa26-LSL-DTR /-（Clec4fDTR）小鼠注射了白喉毒素（DT）。同樣，KC的消耗對轉移播種也沒有影響。因此，該模型肝臟中的腫瘤細胞轉移播種可以獨立于巨噬細胞發生。
為研究腫瘤細胞與不同肝臟巨噬細胞亞群之間的細胞-細胞相互作用。我們對正常小鼠的肝臟進行了單細胞RNA測序，并確定Clec4f作為一個差異表達基因，能夠區分肝臟常駐的Kupffer細胞（KCs）和骨髓來源的巨噬細胞（BMDMs）（下圖a–d），與先前的文獻一致。基于這一發現，我們使用Clec4f作為KC特異性標記，利用多重免疫組化（mIHC）研究腫瘤細胞與肝臟巨噬細胞亞群之間的相互作用。種植的腫瘤細胞更常被發現與F4/80 BMDM接觸，而不是F4/80 Clec4f KC（下圖e–h）。此外，在已建立的轉移瘤（擴展階段）中，BMDMs主要存在于病變內部。相比之下，如預期的那樣，居住在肝竇中的KCs僅限于附近的肝臟組織（下圖2i–l）。因此，不同譜系的巨噬細胞亞群存在于與轉移病灶相關的空間區域，并可能在轉移過程中以不同方式與腫瘤相互作用。
巨噬細胞以前被認為在肝臟中的轉移中起到支持作用。為了測試巨噬細胞在轉移生長階段的作用，我們在轉移種植后應用了荷蘭Liposoma廠家的包裹有氯膦酸的脂質體ClodronateLiposomes（CEL）以耗竭肝臟巨噬細胞。在這種情況下，巨噬細胞的耗竭顯著減少了肝臟中的腫瘤負擔。接下來我們測試了庫普弗細胞在調節轉移生長中的作用。為此，Clec4fDTR小鼠在腫瘤種植后每天接受DT治療以耗竭庫普弗細胞。在該模型中，庫普弗細胞的耗竭并未影響轉移負擔。綜合以上數據，這些結果與腫瘤相關巨噬細胞在支持轉移生長中的作用一致，而不是庫普弗細胞，這一點之前也曾被提出過。
Clodronate Liposomes氯膦酸鹽脂質體清除肝臟巨噬細胞，疾病模型為：門靜脈注射PDACYFP-cells。PDAC是胰腺導管腺癌（Pancreatic Ductal Adenocarcinoma）的縮寫，屬于胰腺癌中常見且惡性程度高的類型，占胰腺惡性腫瘤的85%-90%。它起源于胰腺導管上皮細胞，侵襲性強、進展迅速，多數患者確診時已處于中晚期，5年生存率不足10%。荷蘭Liposoma巨噬細胞清除劑Clodronate Liposomes見刊于Nature Communications：Kupffer 細胞可防止小鼠胰腺導管腺癌轉移到肝臟。Clec4f可以區分肝臟巨噬細胞KF和骨髓來源巨噬細胞BMDM嗎？詳細類容可以見如下文獻。
論文信息：
論文題目：Kupffer cells prevent pancreatic ductal adenocarcinoma metastasis to the liver in mice
期刊名稱：Nature Communications
時間期卷：14, Article number: 6330 (2023)
在線時間：2023年10月10日
DOI：doi.org/10.1038/s41467-023-41771-z
產品信息：
貨號：C-010
規格：10ml
品牌：Liposoma
產地：荷蘭
名稱：Clodronate Liposomes
辦事處：Target Technology(靶點科技)
